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**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:10 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Dutchies sur CurEvents

Traductio automatique

Le minist?re bulgare de l'agriculture et de la sylviculture prend des mesures au-dessus de cas de grippe d'oiseau en Bulgarie m?ridionale

20 juillet 2006 | 17:13 | Agence de presse de FOYER

Sofia. Un cas de grippe d'oiseau a ?t? enregistr? dans un village en Bulgarie m?ridionale. Des ?chantillons ont ?t? pr?lev?s apr?s qu'un grand nombre de volaille ait ?t? la mort trouv?e dans le village de Slanchogled (municipalit? de Dzhebel, zone de Kardzhali). Le minist?re de l'agriculture et de la sylviculture a re?u un message jeudi ? 3 P.M., qui ont confirm? que la maladie est grippe aviaire, ministre d'agriculture bulgare et la sylviculture Nihat Kabil a indiqu? ? une conf?rence de presse, un journaliste de l'agence de presse de FOYER rapport?e.
Nihat Kabil a imm?diatement inform? le premier ministre Sergey Stanishev, le Pr?sident Georgi Parvanov, ministre de la politique Emel Etem de gestion des d?sastres et Ministre de la Sant? Radoslav Gaydarski.
Nihat Kabil a command? tous les oiseaux dans la r?gion de la municipalit? ?tre cueillis. Des compensations seront pay?es aux propri?taires. M. Kabil a soumis ? une contrainte que le minist?re prend des mesures contre la maladie.
Les r?sultats de la contrainte du ’ s de virus seront pr?ts en quatre jours. Alors les ?chantillons seront envoy?s ? un laboratoire de r?f?rence en Grande-Bretagne.

http://www.focus-fen.net/index.php?catid=91&ch=0&newsid=92597

La Bulgarie trouve la grippe aviaire dans les oiseaux domestiques
20 juillet 2006 14:22 : GMT 41
Source : Reuters

SOFIA, 20 juillet (Reuters) - Bulgarie a indiqu? jeudi o? il avait d?tect? une manifestation de grippe d'oiseau dans trois fermes d'arri?re-cour dans un village dans les sud du pays pr?s ? la fronti?re turque.

? Il a montr? que c'est grippe d'oiseau, nous ne savent pas la contrainte exacte encore. Nous travaillons ? la pr?somption que c'est une contrainte fortement pathog?ne de H5N1, ? les journalistes dits par Kabil de Nihat de Ministre de l'agriculture.

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**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:15 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Dutchie sur CurEvents

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Ministre de l'agriculture de la Bulgarie : Tous apaisent dans les nouvelles d'AreaTop d'Oiseau-Grippe : 21 juillet 2006, vendredi.

Le Ministre de l'agriculture de la Bulgarie Nihat Kabil a dit vendredi qui tout ?tait calme dans le secteur o? les premiers cas d'oiseau-grippe en volailles domestiques dans le pays ont ?t? enregistr?s.

Il n'y a aucune panique, Kabil a indiqu? pour le bTV priv?, expliquant que les gens ?taient calmes et que les ?quipes travaillaient ? la pleine commande de puissance pour d?sinfecter le secteur et pour ?liminer tous les oiseaux l?. Quatre ?quipes du nord de la Bulgarie ont voyag? au village de Slanchogled dans les sud, o? elles aident des gens du pays font face ? la situation.

Une machine de d?sinfection a ?t? envoy?e de la ville de Danube de Ruse, et une autre est pr?vue bient?t de Smolyan, le ministre a dit. Il s'est ?galement vou? que toutes les 480 volailles dans le secteur seraient extermin?es par dix le matin vendredi.

Le minist?re n'a pas retard? ses actions au-dessus de la menace de grippe aviaire, Kabil a soumis ? une contrainte, il a expliqu? que par le pass? h? ?taient certains que les oiseaux ?taient porteur du virus que leurs actions ?taient rapides et par le livre.

La Bulgarie a d?j? alert? la Commission europ?enne de la menace, et attend maintenant sur un verdict d'embargo. Kabil a indiqu? qu'il a esp?r? qu'il n'y aurait pas une interdiction totale des exportations de viande du pays, mais que l'UE arrangerait pour une interdiction r?gionale. Il n'y a aucun grand producteur de volaille dans le secteur o? la grippe aviaire a ?t? d?tect?e, et nous gardons des choses sous la commande, tellement il n'y a pas vraiment le besoin d'interdiction totale, le ministre a dit.

Kabil a conclu en se vouant que tous les propri?taires d'oiseau seraient compens?s les volailles tu?es. Il a ?galement dit que malgr? le fait que plusieurs des personnes dans le secteur principalement Turc-peupl? n'ont pas parl? bulgare, il n'y avait aucun probl?me dans la communication.

Bulgaria's Agriculture Minister: All Quiet in the Bird-Flu Area - Novinite.com - Sofia News Agency

http://www.novinite.com/view_news.php?id=66808

Bulgaria's Agriculture Minister Nihat Kabil said Friday that everything was calm in the area where the first bird-flu cases in domestic fowls in the country have been registered. There is no panic, Kabil said for private bTV, explaining that people were calm and that teams were working at full throttle to disinfect the area and do away with all the birds there.

La Bulgarie cueille des volailles ? Oiseau-Grippe-A frapp? le secteur

La politique : 21 juillet 2006, vendredi.

Les autorit?s bulgares ont pass? la nuit exterminant des volailles comme tout le pays a ?t? choqu? pour apprendre jeudi qu'une grippe aviaire outspread a ?t? d?tect?e ? une ferme dans le village m?ridional de Slanchogled.

Teams are working at full throttle to disinfect the area around the village of Slanchgled, Kardzhali region, where a bird flu outbreak was detected July 20. Photo by BTA

C'est le premier un tel cas dans le pays des Balkans et le minist?re d'agriculture lutte maintenant pour tuer toutes les volailles dans la r?gion avant que le virus ?carte pas plus. C'est toujours inconnu si la grippe d'oiseau de yhe est de la contrainte H5N1 mortelle, mais jusqu'? ce que les r?sultats de repos aient lieu dedans le lundi, un total de 480 oiseaux devront ?tre mis ? la mort.

Les m?decins et les m?decins g?n?ralistes dans le secteur sont ? une alerte rouge, pr?te ? rapporter tous les cas soup?onneux des patients pr?sentant des sympt?mes de grippe aviaire, mais jusqu'ici il n'y a aucune indication que le virus s'est ?cart?e aux gens aussi bien. Cependant, des prises de sang de cinq des r?sidants du village seront examin?es avec les ?chantillons pr?lev?s des volailles infect?es.

La d?sinfection massive est en cours dans le secteur entier et la commande renforc?e sur passer des camions et des v?hicules est install?e, Ministre de l'agriculture Nihat que Kabil a annonc?. Il a ajout? tous les fermiers dont la volaille a ?t? cueillie sera compens?e.

L'information ? la situation de grippe d'oiseau a ?t? conf?r?e au premier ministre Sergey Stanishev, Pr?sident Georgi Parvanov, ministre Emel Etem de gestion de d?sastres, et ministre de sant? Radoslav Gaydarski, leur coll?gue d'agriculture ?galement dit.

Bulgaria Culls Fowls in Bird-Flu-Hit Area - Novinite.com - Sofia News Agency

http://www.novinite.com/view_news.php?id=66805

Bulgarian authorities have spent the night exterminating fowls as the whole country was shocked to learn Thursday that an avian flu outspread has been detected at a farm in the southern village of Slanchogled. This is the first such case in the Balkan country and the Agriculture Ministry is now struggling to kill all the fowls in the region before the virus spreads any further.

**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:16 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Crédits: Dutchie sur CurEvents

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Une grippe dedans

Baromètre : 21 juillet 2006, vendredi.

Par Petya Sabinova

Nous l'avons eu venir, nous avons seulement nous-mêmes pour blâmer, pour reformuler la chanson de Chicago musicale. Savoir que le pays est entouré par des voisins combattant la grippe aviaire et la croyance que nous étions de façon ou d'autre intouchables étions stupides et la nature ont finalement eu le dernier rire. La vérité est nous tendent à relâcher. Deux ou trois jours sur l'alerte rouge et nous deviennent de moins en moins alertes. Le type effrayant vérifiant votre panier à la frontière est de moins en moins intéressé par ce que vous portez. Est-ce qu'il de plus en plus est engagé dans mordre ses ongles, et le poof, ou devrait je dire le gazouillement, a dedans piloté la grippe.
Aucun point en pleurant au-dessus du lait renversé, cependant, tellement maintenant nous devons nous concentrer sur ce qui vient après. Il est temps pour que les autorités prouvent qu'ils valent leur budget de secours et suppriment le danger avant qu'il se développe. Jusqu'ici le système semble fonctionner bien, mais toute l'une chose qui pourrait l'apporter avalent est avarice. Je dirais que le salaire tous les villageois vous peut pour la volaille tuée et n'est pas avare, parce que s'ils se sentent ils sont dupés nul ne peut dire où ils vendraient la viande et qui finirait diner vers le haut là-dessus.

http://www.novinite.com/view_news.php?id=66817

Blâmez les Turcs. :

Turcs ethniques suspectés pour la manifestation de grippe d'oiseau en Bulgarie

Nouvelles supérieures : 21 juillet 2006, vendredi.

Les Turcs ethniques ont apporté le plus probablement en Bulgarie le virus de grippe d'oiseau qui a déclenché une manifestation de la maladie dans un village méridional.

The village of Slanchogled, Southern Bulgaria, will be quarantined for twenty-one days in an attempt to prevent the spread of the bird flu virus. Photo by BTA

Le village de Slanchogled, peuplé principalement par les Turcs ethniques, a été choqué pour apprendre jeudi qu'un accès de grippe aviaire a été détecté à une ferme locale.

On suspecte des Turcs ethniques, qui sont revenus à la Bulgarie en été, pour avoir les oiseaux infectés illégalement importés de Turquie voisine, rapports disent.

Le village de Slanchogled sera mis en quarantaine pendant une période de vingt et un jours afin d'essayer d'empêcher la diffusion du
virus, autorités annoncées.

La police a isolé le secteur en établissant deux points de contrôle à l'entrée et à la sortie du règlement, laissant dans aucun autre mais des gens du pays et seulement après les désinfecter.

Ethnic Turks Suspected for Bird Flu Outbreak in Bulgaria - Novinite.com - Sofia News Agency

http://www.novinite.com/view_news.php?id=66821

Ethnic Turks have most probably brought to Bulgaria the bird flu virus that triggered an outbreak of the disease in a southern village.

**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:29 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Dutchie sur CurEvents

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Ministre d'agriculture : Les ?chantillons provenant du village de Slanchogled n'ont pas examin? le positif pour les contraintes H5 ou H7

21 juillet 2006 | 14:05 | Agence de presse de FOYER

Slanchogled. Selon des r?sultats du laboratoire de r?f?rent du service m?dical v?t?rinaire national ? Sofia, les ?chantillons provenant des oiseaux dans le village bulgare de Slanchogled n'ont pas examin? le positif pour le H5 fortement pathog?ne ou les contraintes H7 du virus de grippe d'oiseau, le ministre de l'agriculture Nihat Kabil ont indiqu?. Selon le minist?re les essais doivent ?tre confirm?s par un laboratoire en Grande-Bretagne.

http://www.focus-fen.net/index.php?catid=141&newsid=92645&ch=0&datte=2006-07-21

**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:31 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Commonground sur CurEvents

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21.07.2006 La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau

SOFIA (bnn) - Bulgarie a enregistr? le premier cas de grippe d'oiseau dans le pays, le minist?re Nihat Kabil d'agriculture annonc? le jeudi.

Le r?glement dans la r?gion de Kardzhali, 260 kilom?tres (162.5 milles) de du sud-est de Sofia, a ?t? isol? avec environ 3 port?e en km. Plus la volaille de 500 doivent ?tre d?truites. Deux hommes ont ?t? proches des oiseaux et sont sous la surveillance. La contamination a ?t? trouv?e en cour priv?e le 11 juillet. Le ’ initial de v?t?rinaires doute de que c'?tait un d?c?s de Newcastle n'ont pas ?t? confirm?s. L'existence montr?e nouveau par contr?le de grippe d'oiseau. Le type du virus sera clair dans le temps de quatre jours et il sera clair s'il soutient la contrainte H5N1 mortelle humaine. L'information au-dessus de la situation a ?t? fournie au premier ministre Sergey Stanishev, le Pr?sident Georgi Parvanov, et d?sastres et ministres de sant?, fonctionnaires suppl?mentaires. /bnn/

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http://www.bgnewsnet.com/story.php?lang=en&sid=21873

**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:36 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Solitaire sur CurEvents

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Ministre d'agriculture : Il n'y a aucun danger pour des personnes en raison de la grippe d'oiseau

22 juillet 2006 | 13:30 | Agence de presse de FOYER

Blagoevgrad. Il n'y a aucun besoin de d?truire la volaille dans la zone de trois kilom?tres autour du village de Slanchogled, le ministre de l'agriculture Nihat Kabil indiqu? pour l'agence de FOYER qui visite le secteur aujourd'hui.

Les essais prouvent que la contrainte de la grippe d'oiseau est du type ” A qui n'?tait pas dangereux pour des humains, il a soumis ? une contrainte.

Il n'y a aucune panique. Les personnes prennent les choses tr?s paisiblement et avec responsabilit?, ministre Kabil annonc? et ont pr?cis? que le paiement des compensations des fermiers commencera lundi.

Il est apparu clairement que les personnes ?taient davantage qu'inform?es, la volaille ?taient en yards et les maires ont mis ? jour les listes avec le nombre d'oiseaux et ?taient surveillance pour d'autres foyers

http://www.focus-fen.net/index.php?catid=91&newsid=92696&ch=0&datte=2006-07-22

**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:40 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Christian sur CurEvents

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Grippe aviaire bulgare probablement pas de type fortement virulente

23 juillet 2006 12:43 : GMT 31
SOFIA, 23 juillet (Reuters) - grippe d'oiseau rapport?e en Bulgarie n'est pas la semaine derni?re le plus probablement du H5 fortement virulent ou la contrainte H7, potentiellement dangereuse pour des humains, les fonctionnaires v?t?rinaires a indiqu? dimanche.

Les tests pr?liminaires des ?chantillons provenant du secteur affect? ont montr? la pr?sence ?galement de la maladie de Newcastle qui pourrait avoir contribu? pour les d?c?s de masse d'environ 200 oiseaux.

La Bulgarie a rapport? sa premi?re manifestation de la grippe aviaire dans la volaille domestique jeudi dans un village pr?s de sa fronti?re avec la Gr?ce et la Turquie et a cueilli la volaille environ 1.500 depuis lors pour emp?cher le virus d'?carter.

? C'est une infection m?lang?e entre la grippe d'oiseau et la maladie de Newcastle. Le virus de grippe d'oiseau que nous avons isol? a jusqu'ici examin? le n?gatif pour H5 et les contraintes H7, ? a dit Georgi Georgiev, un scientifique avec l'institut v?t?rinaire bulgare.

Il a dit que la Bulgarie enverra les ?chantillons ? un laboratoire Eu-certifi? en Grande-Bretagne et s'attendra toujours aux r?sultats finaux dans quelques semaines.

Les autorit?s ont install? une zone de quarantaine de 3 kilom?tres (deux milles) autour du village affect?, y compris un secteur de sept villages suppl?mentaires avec un total de 2.100 oiseaux domestiques, comme d?marche pr?ventive. Le minist?re de l'agriculture du pays des Balkans a indiqu? il a pr?vu que l'UE pourrait interdire des exportations de volaille seulement des secteurs affect?s, mais une d?cision finale par Bruxelles est de sortir le lundi.

La Bulgarie a rapport? quatre cas d'infection de grippe d'oiseau H5N1 dans les cygnes sauvages plus t?t cette ann?e, mais n'a pas souffert aussi s?v?rement que ses voisins Turquie et Roumanie.

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**Giuseppe** · July 25, 2008, 12:42 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Above URL is broken, the page was removed!

**Diane Morin** · July 25, 2008, 12:45 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Cr?dits: Christian sur CurEvents

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La Bulgarie ne trouve aucun signe de la contrainte H5N1 dans les oiseaux morts

24 juillet 2006 11:21 : GMT 19
(Ajoute les d?tails, le fond)
SOFIA, 24 juillet (Reuters) - essais finaux a montr? qu'une manifestation de grippe d'oiseau en Bulgarie m?ridionale n'?tait pas la contrainte H5N1 mortelle, le Ministre de l'agriculture Nihat Kabil a dit lundi.

? Les bonnes nouvelles sont et maintenant je peux confirmer : les essais ont ?tabli le virus n'?taient pas la contrainte H5, ni H7, que les moyens il ne peuvent pas ?tre les H5N1 mortels, ? Kabil a indiqu? des journalistes.

Le pays des Balkans a cueilli plus de 1.500 poulets et dindes dans le village de Slanchogled, pr?s de la fronti?re avec la Gr?ce et la Turquie, depuis le jeudi pass?, apr?s elle ont d?tect? sa premi?re manifestation de grippe aviaire dans les oiseaux domestiques dans des fermes d'arri?re-cour.

Kabil a indiqu? une zone protectrice de 3 kilom?tres (2 milles) pr?s du village sera gard?e en place jusqu'au 10 ao?t pour s'assurer que la manifestation est contenue.

Il a dit qu'il s'est attendu ? ce que l'Union europ?enne interdise des exportations de volaille de la r?gion bient?t, mais n'interdise pas des exportations de tout le pays en raison des mesures prises pour emp?cher la diffusion du virus.

Dimanche, les fonctionnaires v?t?rinaires ont d?clar? que l'infection d?tect?e dans trois fermes d'arri?re-cour ?tait un m?lange de virus de grippe aviaire et de maladie de Newcastle.

La Bulgarie enverra des ?chantillons ? un laboratoire Eu-certifi? en Grande-Bretagne pour davantage d'essai.

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**Giuseppe** · July 25, 2008, 12:47 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

I don't understand the situation.

Another broken URL address.

[Problem resolved. Excuse me for the intervention. IOH]

**Diane Morin** · July 25, 2008, 01:21 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Ce ne sont pas des liens permanents je suppose.

**Diane Morin** · July 25, 2008, 01:26 PM

Re: La Bulgarie confirme le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

Credits: Ironorehopper

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Eurosurveillance, volume 13, issue les 30,24 juillet 2008
Perspectives
Recherche de laboratoire sur les cas humains d'abord suspectés de l'infection avec le virus de l'influenza aviaire A (H5N1) en Bulgarie
T Hadzhiolova1, S Pavlova1, R Kotseva () <SUP>1</SUP>

Département de la virologie, centre national des maladies infectieuses et parasites, Sofia, Bulgarie

<HR class=Centre_divider>Modèle de citation pour cet article : Hadzhiolova T, Pavlova S, recherche de laboratoire de Kotseva R. des cas humains d'abord suspectés de l'infection avec le virus de l'influenza aviaire A (H5N1) en Bulgarie. Euro Surveil. 2008 ; 13 (30) : pii=18938. Accessible en ligne : http://www.eurosurveillance.org/View...rticleId=18938

Date de la soumission : 14 avril 2008 <HR class=Centre_divider>
Les rapports des cas humains de l'infection avec le virus de l'influenza aviaire A (H5N1) ont reçu l'attention du public accrue en raison du potentiel pour l'apparition d'une contrainte universelle. À la fin de 2005 et le début de 2006, des manifestations causées par virus de l'influenza aviaire A (H5N1) parmi la volaille domestique et ont été isolées dans les cygnes sauvages dans beaucoup de pays européens, y compris la Bulgarie. Entre janvier et le mars 2006, des échantillons ont été rassemblés de 26 patients qui avaient été en contact étroit avec les oiseaux malades ou morts et ont développé une maladie respiratoire suivante. L'essai a eu lieu au laboratoire national de la grippe à Sofia. Les analyses spécifiques de А (H5N1) étaient appliquées pour le criblage (Sacace RT-PCR et le kit en temps réel). Le virus de la grippe aviaire А (H5N1) n'a pas été détecté dans les patients l'uns des examinés. Dans trois patients, le virus de grippe humain du sous-type А (H1N1), identifiable par RT-PCR a été isolé et plus loin caractérisé par l'essai d'inhibition d'hémagglutination (COUP). La fiabilité des analyses moléculaires utilisées dans cette recherche a été démontrée dans un contrôle de qualité international pour la grippe humaine et aviaire de А (H5N1) exécutée plus tard en 2006 par INSTAND (société pour la promotion de la garantie de qualité dans les laboratoires médicaux), Allemagne.

<HR>Introduction
Des virus de l'influenza aviaire (AI) sont divisés en ceux de la pathogénicité de ciel et terre (HPAI et LPAI). Dans la volaille domestique, l'infection avec LPAI peut disparaître non détectée et cause habituellement seulement des symptômes doux. Cependant, la forme fortement pathogène écarte plus rapidement, et a un taux de mortalité qui peut atteindre 90-100% souvent dans un délai de 48 heures. Le type A (H5N1) de virus de grippe est fortement pathogène et très infectieux pour un certain nombre d'espèces d'oiseau comprenant la plupart des espèces de volaille gardées domestiquement. Le virus d'A (H5N1) n'infecte pas habituellement des personnes, mais les infections avec ces virus se sont produites chez l'homme, avec les premiers cas détectés en 1997, à Hong Kong. La plupart des cas humains ont résulté des personnes ayant le contact direct ou étroit avec A (H5N1) - volaille infectée ou A (H5N1) - les surfaces souillées. Bien que des virus d'influenza aviaire actuellement soient mal adaptés aux humains, le potentiel demeure pour l'apparition de nouvelles contraintes universelles directement des virus aviaires, ou de leur recombinaison avec l'humain ou d'autres virus animaux. [1.2.3.4].
À la fin de 2005 et le début de 2006, le virus A (H5N1) d'influenza aviaire a causé un certain nombre de manifestations parmi la volaille dans les pays près de la Bulgarie, y compris la Turquie, la Roumanie et l'Ukraine [5.6.7]. En outre, la Turquie a enregistré ses deux premiers cas humains de l'infection d'A (H5N1) en janvier 2006. Au cours de cette période le virus a été également isolé dans les cygnes sauvages dans beaucoup de pays européens [6]. En Bulgarie, les services vétérinaires nationaux ont détecté quatre cas d'infection d'A (H5N1) dans les cygnes sauvages à la côte de la Mer Noire et le long du fleuve de Danube, en janvier 2006 [6.8].
En réponse à la plus grande circulation des virus d'influenza aviaire d'A (H5N1) à la fin de 2005 et au début de 2006, le ministère de la Santé bulgare a renforcé ses activités relatives à la surveillance et à la commande de grippe. Le plan national d'état de préparation de grippe de pandémie était approuvé. Les sièges sociaux nationaux du Comité et de crise de grippe de pandémie ont été établis. Le gouvernement a fourni le financement additionnel pour fournir les drogues antivirales, le matériel de protection et les kits diagnostiques. Des mesures ont été également prises d'informer les membres du personnel soignant et le public au sujet du risque de transmission possible de virus d'A (H5N1) parmi la volaille et aux humains.
En plus de ces actions, le criblage des cas humains potentiels de l'infection avec le virus A (H5N1) d'influenza aviaire a été entrepris. Ceci a exigé mettre en place le diagnostic efficace non seulement des infections humaines de grippe, mais des infections d'influenza aviaire aussi bien.
L'identification de laboratoire des infections de virus de grippe est généralement accomplie par détection d'antigène, isolement dans la culture de cellules, ou détection de l'ARN grippe-spécifique par fortement - l'amplification en chaîne par réaction renversée sensible et spécifique de transcriptase (RT-PCR). Cette méthode, y compris des essais de détection de génome, a été plus tard adaptée et examinée pendant la recherche sur les cas humains d'abord suspectés du virus de l'influenza aviaire А (H5N1), comme décrit ci-dessous. [9]
Méthodes
Afin de la recherche, des patients qui ont éprouvé grippe-comme des symptômes et avaient été en contact étroit avec les oiseaux malades ou morts ou ont eu une histoire de voyage aux pays avec l'humain enregistré et et/ou les cas animaux de grippe aviaire ont été considérés des cas suspectés de l'infection d'A (H5N1). Des échantillons prélevés de ces patients ont été envoyés au laboratoire national de la grippe pour le criblage.

Les tiges nasopharyngales de vingt-six patients et de spécimens de poumon et trachéaux post mortem de tissu et bronchoalvéolaires de lavage de deux patients étaient disponibles pour l'essai. Les spécimens ont été rassemblés en milieu viral approprié de transport (&Dickinson de Becton, Etats-Unis) et ont été embarqués immédiatement au laboratoire, selon les règlements des directives d'OMS pour la collection, le stockage et le transport des spécimens humains et animaux pour le diagnostic de laboratoire de l'infection suspectée de la grippe A. [10.11] Les échantillons ont été examinés immédiatement, ou, au cas où il n'était pas possible, ils ont été gelés - à 70°C. Tous les spécimens ont été rassemblés au cours de la période de janvier au mars 2006. Des données de `de patients sur le sexe, l'âge et la source d'infection potentielle sont montrées dans le tableau 1.

Le tableau 1. a suspecté des cas humains de l'infection de А (Н5N1) étudiée dans le laboratoire national de la grippe en Bulgarie au cours de la période janvier - mars 2006

Les spécimens initiaux ont été examinés pour l'ARN viral par RT-PCR. L'ARN a été extrait en employant la solution monophasique du phénol et du l'isothiocyanate-Trizol LS (technologies de la vie d'Invitrogen, Etats-Unis) de guanidinium une amélioration de la méthode à pas unique d'isolement d'ARN comme étant développé par Chomczynski et Sacchi. [12]

Pour la détection du virus А (Н5N1) d'influenza aviaire nous avons employé l'influenza aviaire de RT-PCR par criblage du virus (H5, H7) et kit de dactylographie (Sacace, Italie). Pour la détection des virus de grippe humains nous avons appliqué RT-PCR conventionnel - en une étape Prêt-à-Vont le kit de perles de RT-PCR (biosciences d'Amersham, Royaume-Uni). Nous avons employé des paires spécifiques d'amorce pour le sous-type A (Н1N1), A (Н3N2) et pour le type B (ha), dirigé contre des régions fortement conservées du segment de gène du hemagglutinin (ha) [13.14].

L'ARN du virus de grippe A (H5) des kits commerciaux ou de la grippe humaine de laboratoire standard tend A (H1), A (H3) et B (ha) ont été employés en tant que commandes positives ; ddH2O ont été employés en tant que commandes négatives. Des virus ont été isolés dans ces échantillons qui étaient positifs dans le RT-PCR par un passage dans la variété de cellule canine du rein de Madin-Darby (MDCK) et deux passages suivants en oeufs embryonated de poulet [13]. L'isolement viral a été effectué pour la période de 7-10 jours. Les contraintes d'isolement ont été identifiées par l'essai d'inhibition d'hémagglutination (COUP) utilisant le kit de réactif de grippe d'OMS pour l'identification de la grippe isolates-2005-2006 ou les antisérums de laboratoire à différentes contraintes humaines de la grippe A (H1N1), de la norme d'A (H3N2) et de B.

En 2006, le laboratoire national de la grippe et les maladies respiratoires aiguës ont également subi un contrôle de qualité international (IQC) facilité par la société pour la promotion de la garantie de qualité dans les laboratoires médicaux (INSTAND), Allemagne. Nous avons reçu 16 échantillons simulés pour des virus d'influenza humaine et aviaire et des virus syncytiaux respiratoires (RSV) dans le but pour identifier leur composition antigénique et genomic. Cet IQC s'est composé de deux étapes : le premier a été exécuté en mars tandis que la recherche sur les points de droit humains suspectés pour A (H5N1) était encore continue ; et le deuxième a eu lieu en octobre 2006.

Les spécimens envoyés d'INSTAND ont été examinés au commencement par l'analyse d'immunomembrane de la grippe A+B (&Dickinson de Becton, Etats-Unis) de Directigen pour la détection de la nucléoprotéine virale (NP) et la différentiation des virus du type A et de la grippe de B. Le kit spécifique de détection de l'antigène Н5 (GeNet bio, Corée) et l'influenza aviaire de RT-PCR par criblage du virus (H5, H7) et kit de dactylographie (Sacace, Italie) ont été employés pour la détection du virus d'influenza aviaire de А (Н5N1). Pour la détection des virus de grippe humains par RT-PCR, en une étape Prêt-à-Vont les perles de RT-PCR (biosciences d'Amersham, R-U) ont été employées comme décrit avant. Les spécimens d'IQC positifs pour А (Н5N1) par RT-PCR conventionnel ont été confirmés une fois de plus par ACP en temps réel utilisant aviaire un criblage et Un H5N1 dactylographiant Sc de FRT (Sacace, Italie), selon le protocole standard à deux étages de Sacace. Nous avons employé le système en temps réel d'ACP de Chromo 4 (Bio-Rad, les Etats-Unis). On a observé la fluorescence sur le canal de FAM pour le cDNA aviaire d'A dans la première phase (kit en temps réel d'amplification), et sur le canal de FAM pour le cDNA aviaire H5 d'A, et sur le canal Cy3 pour le cDNA aviaire N1 d'A. [14]
Résultats
Sur la base des critères de définition de cas, 26 patients ont été considérés des cas suspectés de l'influenza aviaire (tableau 1). Tous ces patients exhibés grippe-comme des symptômes et l'un ou l'autre ont eu le contact avec les oiseaux malades ou morts ou avaient voyagé aux secteurs affectés par l'influenza aviaire. Quatre patients (le nr 8, 9, 22, 23 dans le tableau 1) avec des symptômes plus graves ont été hospitalisés et deux d'entre eux sont plus tard morts (8 et 22). Des patients étudiés, 17 étaient des hommes et 9 étaient des femmes. La plupart d'entre eux vivait dans les secteurs où des virus de А (Н5N1) ont été trouvés dans les cygnes.
Des groupes cliniques (tiges nasopharyngales) de chacun des 26 patients et spécimens post mortem de poumon et trachéaux de tissu et bronchoalvéolaires de lavage de deux patients décédés ont été rassemblés entre janvier et le mars 2006 et envoyés pour examiner au laboratoire national de la grippe.

Le virus de la grippe aviaire А (H5N1) comme agent causatif de la maladie respiratoire n'a été détecté dans des aucuns des patients examinés après le criblage des spécimens cliniques initiaux par RT-PCR.

Simultanément exécutées, RT-PCR utilisant des paires spécifiques d'amorce d'ha a trouvé trois spécimens positifs pour les virus de grippe humains d'A (H1).
Après le criblage d'ACP, des contraintes de grippe des mêmes des spécimens patients ont été isolées et identifiées par COUP en tant que А/humain Nouvelle-Calédonie /20/99 (H1N1) - comme des virus. Cette recherche a été effectuée parce qu'une épidémie de la grippe (humaine) saisonnière avait lieu en même temps.
L'exactitude de l'essai moléculaire utilisée pour la détection des cas humains suspectés de l'influenza aviaire A (H5N1) a été démontrée dans l'IQC. Neuf des 16 spécimens reçus du positif examiné par INSTAND pour l'ARN d'A (H5N1) en employant RT-PCR conventionnel en mars et l'octobre 2006 (le schéma 1). Les tailles obtenues des produits amplifiés étaient le point d'ébullition 365.

Le schéma 1. RT-PCR pour la détection du virus d'influenza aviaire de А (Н5N1) dans les échantillons simulés envoyés d'INSTAND (Allemagne) pour le contrôle de qualité international au laboratoire national de la grippe, Bulgarie, 2006

Des résultats positifs pour des échantillons de А (Н5) provenant d'IQC ont été confirmés également par ACP en temps réel. Le schéma 2 montux les résultats positifs de trois a simulé des échantillons en comparaison de la commande positive et négative du kit.
Le schéma ACP de temps réel de 2. pour la détection du virus d'influenza aviaire de А (Н5N1) dans les échantillons simulés envoyés d'INSTAND (Allemagne) pour le contrôle de qualité international au laboratoire national de la grippe, Bulgarie, 2006

Depuis 2007 le laboratoire national de la grippe et des maladies respiratoires aiguës comme centre de référence national bulgare a participé également à l'évaluation de qualité externe (EQA) organisée par l'organisation mondiale de la santé (OMS), et facilitée par Virology Division du département de la santé à Hong Kong. Les résultats de la recherche sur les échantillons simulés que nous avons reçus pour examiner du groupe 3 d'OMS EQA a en février 2008 eu l'exactitude 100%. [14]
Discussion et conclusion
Dès que les premiers cas d'A (H5N1) dans les oiseaux sauvages (cygnes) ont été détectés en Bulgarie, les autorités de santé publique l'ont considéré important pour développer une approche plus sensible en définissant et en étudiant des cas humains suspectés de l'influenza aviaire dans le laboratoire national de la grippe. En liaison avec l'approbation du plan national d'état de préparation de grippe de pandémie le laboratoire national de la grippe a reçu l'équipement et les essais nécessaires pour l'application de nouvelles méthodes diagnostiques pour la détection des virus de grippe. L'introduction d'un complexe des méthodes diagnostiques contemporaines a été visée pour augmenter l'état de préparation de notre laboratoire en conditions d'une diffusion potentielle de virus de l'influenza aviaire A (H5N1).

Beaucoup de pays ont conduit des programmes de dépistage pour la détection de l'infection d'A (H5N1) chez l'homme. La Thaïlande a par exemple le programme de large échelle impliquer l'essai des centaines de personnes présent des symptômes respiratoires qui ont également eu une certaine exposition à la volaille [15]. En Europe, la Grèce a eu une expérience semblable d'examiner 26 cas potentiels d'infection d'A (H5N1) au cours de la même période de 2006. Les essais réalisés avec des méthodes moléculaires étaient toutes négatifs [16].

En examinant le premier a suspecté des patients de А (Н5N1) en Bulgarie, nous avons suivi les étapes diagnostiques courantes d'arrangement développées par le laboratoire national de la grippe pour les virus de grippe humains. [13.17]
En raison de la sévérité de la maladie, de la nécessité de la réponse diagnostique rapide, et du manque de la sécurité biologique appropriée level-3 (BSL-3) dans notre laboratoire pour le travail avec des contraintes fortement pathogènes, cet arrangement a été effectué comme suit :
• Criblage des spécimens cliniques initiaux par RT-PCR pour les virus de grippe aviaires et humains (BSL-2) ;
• Isolement des virus de grippe après obtention des résultats négatifs pour A (H5N1) par RT-PCR (BSL-2) ;
• COUP pour l'identification des contraintes humaines d'isolement.
La recherche pour l'infection d'A (H5N1) chez l'homme décrits ici était la première de sa sorte pour notre pratique en matière de laboratoire dans laquelle nous avons dû appliquer l'arrangement dans une nouvelle approche. Bien que rien le positif essai sur par prélèvements pour A (H5N1) nous soit confiant que notre exécution des essais par les techniques moléculaires (RT-PCR et ACP en temps réel) ait été correcte parce que suivant les indications de l'essai de contrôle de qualité des échantillons simulés en lesquels nous avons obtenu des résultats positifs pour les virus d'A (H5N1). Les RT-PCR et les kits en temps réel d'ACP (Sacace, Italie) étaient en juste proportion efficaces en ce qui concerne le criblage et genotyping des spécimens probables de А (Н5N1).

Comme décrit par d'autres auteurs, l'ACP en temps réel trouve de plus en plus l'application dans des diagnostics de grippe, dus à sa sensibilité et spécificité élevées en transformant le diagnostic dans une courte période, et la possibilité de la différentiation simultanée de type et de sous-type des virus directement en spécimens cliniques [18.19].

Dans l'étude que nous avons réalisée, dans l'identification des spécimens d'IQC, ACP en temps réel a été appliqué seulement comme méthode de garantie de qualité pour la confirmation du résultat de RT-PCR dans des diagnostics de А (Н5N1). C'était la première fois que cette technique a été appliquée dans notre pratique en matière de laboratoire.
Les résultats négatifs ont obtenu par H5 GeNet bio en examinant les échantillons d'IQC qui étaient positifs par RT-PCR nous incitent à douter de la sensibilité de cet essai rapide pour la détection d'antigène de virus d'influenza aviaire dans les spécimens cliniques. Par principe l'essai rapide d'antigène n'est pas actuellement recommandé pour la détection de l'influenza aviaire A (H5N1) : un résultat négatif n'exclut pas l'influenza aviaire, et un résultat positif d'un essai d'antigène (méthodes y compris d'immunofluorescence) ne différencie pas les virus entre influenza saisonnière et aviaire A. L'essai confirmatoire et subtyping doivent être exécutés par les méthodes moléculaires (par exemple amplification en chaîne par réaction renversée de transcriptase), la culture de virus ou toutes les deux [9].

En conclusion, la recherche sur les cas humains d'abord suspectés du virus d'influenza aviaire de А (Н5N1) nous a permise d'acquérir des qualifications requises en travaillant avec les agents infectieux fortement pathogènes dans notre pays et d'acquérir l'expérience pratique d'appliquer les méthodes diagnostiques nécessaires pour la détection des antigènes et du génome de la grippe H5 dans extrêmement une courte période. Le travail décrit ici a été de grande importance pour le système de santé publique en Bulgarie en augmentant la surveillance et l'état de préparation de laboratoire. Il a également amélioré la collaboration entre différents établissements et personnes responsables de la santé publique en Bulgarie - diagnostiqueurs d'épidémiologues, de cliniciens, humains et vétérinaires travaillant ensemble sous la direction du ministère de la Santé.

<HR>Références

1. Centre européen pour l'empêchement et la commande de la maladie. Grippe - influenza aviaire. Disponible de : http://ecdc.europa.eu/Health_topics/Avian_Influenza/Avian_Influenza.html
2. Centres pour le contrôle et la prévention des maladies. Influenza aviaire (grippe d'oiseau). Disponible de : http://www.cdc.gov/flu/avian/gen-info/facts.htm
3. L'organisation mondiale de la santé. Influenza aviaire. Disponible de : http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/en/
4. Bâtis aw, Kwong H, Izurieta HS, et autres étude de Cas-commande des facteurs de risque pour la maladie de l'influenza aviaire A (H5N1). J infectent DIS 1999 ; 180:505 - 508
5. Équipe éditoriale. Manifestations de l'influenza aviaire H5N1 dans la volaille roumaine et danoise, et grand faisceau H5N1 dans un famille indonésien. Euro Surveil. 2006 ; 11 (21) : pii=2961. Accessible en ligne : http://www.eurosurveillance.org/ViewArticle.aspx?ArticleId=2961
6. L'organisation mondiale de la santé. Influenza H5N1 aviaire : chronologie des grands événements. Disponible de : http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/Timeline_08%2007%2014%20_2_.pdf (accédé le 20 mars 2007)
7. L'organisation mondiale de la santé. Cas humains de l'infection de la grippe A (H5N1) en Turquie orientale, décembre 2005-janvier 2006. Disque épidémiologique hebdomadaire. 2006 ; 81 (43) : 409-416. Disponible de : http://www.who.int/wer/2006/wer8143.pdf
8. Ministère de l'agriculture des Etats-Unis. Diffusion récente (H5N1) de l'influenza aviaire fortement pathogène dans les oiseaux. APHIS. 22 mai 2006. Disponible de : http://www.aphis.usda.gov/vs/ceah/cei/taf/emerginganimalhealthissues_files/hpai_recentspread.pdf
9. L'organisation mondiale de la santé. Essais en laboratoire recommandés pour identifier le virus de l'influenza aviaire A dans les spécimens des humains. OMS Genève : Juin 2005. Disponible de : http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/guidelines/avian_labtests2.pdf
10. L'organisation mondiale de la santé. Directives d'OMS pour le stockage et le transport des spécimens humains et animaux pour le diagnostic de laboratoire de l'infection suspectée de la grippe A. 12 janvier 2005. Disponible de : http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/guidelines/transport/en/index.html
11. L'organisation mondiale de la santé. Directives de laboratoire d'OMS pour la collection de spécimens animaux pour le diagnostic de l'infection de grippe. 12 janvier 2005. Disponible de : http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/guidelines/animalspecimens/en/index.html
12. Chomczynski P, méthode à pas unique de Sacchi N. d'isolement d'ARN par l'extraction acide de sulfocyanate-phénol-chloroforme de guanidinium. Biochimie anale. 1987 ; 162 (1) : 156-9.
13. Méthodes contemporaines de Hadzhiolova T. pour le diagnostic de virus de grippe et la caractérisation génétique des virus de grippe [dissertation de PhD]. Sofia : Février 2006.
14. Hadzhiolova T, Pavlova S, participation de Kotseva R. du laboratoire national de la grippe et ARD au contrôle de qualité externe pour la détection d'antigène et de génome des virus de grippe et de RSV. Infectology. 2008 ; 1 : 30-33
15. Kitphati R, Apisarnthanarak A, Chittaganpitch M, Tawatsupha P, Auwanit W, Puthavathana P, et autres. Un système de laboratoire nationalement coordonné pour l'influenza aviaire humaine A (H5N1) en Thaïlande : conception de programme, analyse, et évaluation.
Clin infectent le DIS. 2008 ; 46 (9) : 1394-400.
16. Pseudo-manifestation de Spala G, de Panagiotopoulos T, de Mavroidi N, de Dedoukou X, de Baka A, de Tsonou P, de Triantafyllou E, de Mentis A, de Kyriazopoulou V, de Melidou A, de Tsiodras SA des infections A/H5N1 humaines en Grèce et ses implications de santé publique. Euro Surveil. 2006 ; 11 (11) : pii=658. Disponible de : http://www.eurosurveillance.org/ViewArticle.aspx?ArticleId=658
17. Hadzhiolova T, Pavlova S, détection de Kotseva R. et identification du type humain virus de grippe d'A par la réaction en chaîne de Transcriptase-Polymérase renversée en Bulgarie. Médecine de laboratoire. 2006 ; 37 : 129-192.
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19. van Elden LJ, Nijhuis M, Schipper P, Schuurman R, van Loon AM. Détection simultanée des virus de grippe A et B utilisant l'ACP quantitatif en temps réel. Microbiologie de J Clin. 2001 ; 39 (1) : 196-200.

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2006: La Bulgarie confirmait le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

2006: La Bulgarie confirmait le premier cas de grippe d'oiseau avec la volaille

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